DNA测序技术

长期以来 ，DNA测序技术一直是分子生物学相关研究中最常用的技术手段之一 ，从一定程度上推动了该领域的快速发展 。人类基因组计划 、转录组分析 、微生物基因组重测序 、的多态性 (single nucleotide polymorphisms,SNP) 分析等方面也促进了其他生物学领域的研究和发展 。每一代测序技术的更替都标志着生物学中基因芯片 、数据分析 、表面化学 、生物工程等技术领域有了新的突破 ，从而应用在了测序领域 ，大大降低了测序成本 ，提高了测序效率 ，使测序向着高通量 、低成本 、高安全性和商业化的方向发展 。

第二代测序（Next-generation sequencing ，NGS）又称为高通量测序（High-throughput sequencing） ，是基于PCR和基因芯片发展而来的DNA测序技术 。亚洲必赢都知道一代测序为合成终止测序 ，而二代测序开创性的引入了可逆终止末端 ，从而实现边合成边测序（Sequencing by Synthesis） 。二代测序在DNA复制过程中通过捕捉新添加的碱基所携带的特殊标记（一般为荧光分子标记）来确定DNA的序列 ，现有的技术平台主要包括Roche的454 FLX 、Illumina的Miseq/Hiseq等 。由于在二代测序中 ，单个DNA分子必须扩增成由相同DNA组成的基因簇 ，然后进行同步复制 ，来增强荧光信号强度从而读出DNA序列 ；而随着读长增长 ，基因簇复制的协同性降低 ，导致碱基测序质量下降 ，这严格限制了二代测序的读长（不超过500bp） ，因此 ，二代测序具有通量高 、读长短的特点 。二代测序适合扩增子测序（例如16S 、18S 、ITS的可变区） ，而基因组 、宏基因组DNA则需要使用鸟枪法（Shotgun method）打断成小片段 ，测序完毕后再使用生物信息学方法进行拼接 。